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LB培养基是什么培养基

浏览:22 发表时间:2020-10-27 00:00:00

培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。那么LB培养基是什么培养基?LB一般被解释为Luria-Bertani,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语lysogeny broth,即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。


LB培养基是一种培养基的名称,是微生物学实验中最常用的培养基,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.可分为液体培养基和固体培养基。


LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称普通培养基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。


酵母提取物:酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提,再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末,其中氨基酸含量30%以上,总蛋白50%以上,核苷酸10%以上,广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。


胰化蛋白胨:一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的白色粉末,含有丰富的氮源、氨基酸等。


酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等蛋白胨主要提供氮源NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压),其次是提供无机盐。


在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。


LB培养基用途

用于一般细菌培养,特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。


LB培养基使用原理:

蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子氯化钠维持均衡的渗透压葡萄糖提供碳源琼脂是培养基的凝固剂。


LB培养基配制方法

配制每升培养基,应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入:胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。

LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素,并且倒好板。


LB固体培养基倒板

1.配制:100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。

2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。

3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。

4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。 配400ml的话成分按比例减少就行了,pH还是要按规定的。


LB培养基设计不同的离子对大肠杆菌生长状况的影响以下方法仅供参考:

1.首先养几个平板固体培养基培养的大肠杆菌,保证这些细菌来自于同一个克隆

2.采用液体培养并用分光光度计测定浊度来评价大肠杆菌生长。

3.盐可选择氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化锌、铵盐、磷酸盐等

4.浓度差别可做,可不做

5.因为分光光度计的准确性有一定要求,培养时间就不能太长,最多8小时

根据这些条件设计实验就容易了。大体上是,先配制好各种液体培养基然后从1中挑一个菌落放到一个起始的基本LB液体培养基,培养到稍微有点浑时,就可以向各种培养基中加同样体积的细菌最后就是测定OD值了。记得每个培养基做3个重复管。


素材来源于网络。

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