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湖南韵邦IPTG 【367-93-1】 科研用途介绍

浏览:16 发表时间:2019-12-10 00:00:00

大家都知道IPTG【CAS:367-93-1】在生物实验室的用途非常广泛,那么这个在生化研究领域,这个人人知晓的IPTG到底有哪些用途呢?下面小编为大家介绍下吧!

1.IPTG主要用作诱导剂,诱导蛋白表达,诱导乳糖操纵子表达。

2.IPTG通常和X-GAL【CAS:7240-90-6】一起搭配使用,用于蓝白菌落的筛选。

3.IPTG也用在发酵提取,细胞培养中。

4.IPTG还可以用在疫苗研发、大肠杆菌表达目标蛋白、细胞重组表达等研究中。


IPTG诱导原理

首先

E. coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、渗透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。

其次

在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录启动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用与异乳糖相同,是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。


使用方法

首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。


作用

诱导外源基因的表达,普遍应用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,具有易鉴定,易纯化的优点。


湖南韵邦作为国内大型糖苷系列产品生产商,向广大科研单位供应纯度99%~101%的高纯度IPTG。经多次会议商讨改良,湖南韵邦目前完成IPTG【367-93-1】进一步技术纯化。目前湖南韵邦IPTG拥有工业级,试剂级,医用级三个级别。


另外,我司常用生物试剂还有:碘代乙酰胺,X-GAL,PMSF, MOPS,盐酸胍,蛋白酶k,G-418硫酸盐等,产品种类几千种,并代理国内多家知名试剂品牌,欢迎新老顾客前来订购。

 

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