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PMSF的配置方法及注意事项

浏览:11 发表时间:2020-06-24 00:00:00

PMSF是丝氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶抑制剂。它抑制蛋白酶,如糜蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、巯基蛋白酶如凝血酶。PMSF抑制丝氨酸蛋白酶的磺化的丝氨酸残基的活性部位。


PMSF的配制方法:

溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml,分装成小份贮存于-20℃,使用时终浓度一般为1mmol/L。


使用介绍:

1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);

2)10mg/ml溶于异丙醇(或无水乙醇)中;

3)在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.;

4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1mM),储存液浓度为100或200mM;

5)在水液体溶液中不稳定,30分钟就会降解一半,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1h,补加一次。(见水分解,使用前加入);


注意事项:

1.PMSF(苯甲基磺酰氟)溶解到异丙醇中,不能溶解到水中的。-20℃保存也会有结晶析出,这是正常的,等到温度稍高混匀就可以了。

2.PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一定要注意防护,手套和口罩。

3.一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

4.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

5.PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。


素材来源于网络。

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