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蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

细菌蓝白斑筛选原理:

IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


使用浓度:

IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml


直接涂板法:

IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。


预制板:

倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。


注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。


素材来源于网络。

想了解更多生化试剂知识,敬请关注“湖南韵邦生物医药有限公司”官方网站:http://www.hunanyunbang.com/

(本网站所有内容,凡注明来源为“湖南韵邦”,版权均归湖南韵邦所有,未经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,否则将追究法律责任,授权转载时须注明来源:“湖南韵邦”。本网注明来源为其他媒体的内容为转载,转载仅作观点分享,版权归原作者所有,如有侵犯版权,请及时联系我们。)


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蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2019-12-31 00:00:00

细菌蓝白斑筛选原理:

IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


使用浓度:

IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml


直接涂板法:

IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。


预制板:

倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。


注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。


素材来源于网络。

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蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2019-12-31 00:00:00

细菌蓝白斑筛选原理:

IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


使用浓度:

IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml


直接涂板法:

IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。


预制板:

倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。


注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。


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蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2019-12-31 00:00:00

细菌蓝白斑筛选原理:

IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


使用浓度:

IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml


直接涂板法:

IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。


预制板:

倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。


注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。


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蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

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细菌蓝白斑筛选原理:

IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。

但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。


使用浓度:

IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml


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IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。


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注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

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