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改进蛋白酶K(39450-01-6)法提取环境微生物样品总DNA(Zhu S)

NaAc (3M, pH 5.2) 

蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮  

实验步骤:  

(1) 将适量环境样品(如土壤或污泥)装入1.5 ml Eppendorf管; (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA; 

(3) 加入溶菌酶(sigma)至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h; (4) 冻融三个循环(液氮3 min-65℃干热器3min); 

(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%(wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数),65℃温育1h; 

(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)、氯仿抽提; (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸;-20℃放置1h; 

(8) 离心收集12000prm,10min,回收DNA沉淀; (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干; (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测,-20℃保存。 

 

注:这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞,因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少,故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增,其产物通常含有较少的嵌合体(chimera)。

 


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改进蛋白酶K(39450-01-6)法提取环境微生物样品总DNA(Zhu S)

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-12 10:03:22

NaAc (3M, pH 5.2) 

蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮  

实验步骤:  

(1) 将适量环境样品(如土壤或污泥)装入1.5 ml Eppendorf管; (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA; 

(3) 加入溶菌酶(sigma)至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h; (4) 冻融三个循环(液氮3 min-65℃干热器3min); 

(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%(wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数),65℃温育1h; 

(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)、氯仿抽提; (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸;-20℃放置1h; 

(8) 离心收集12000prm,10min,回收DNA沉淀; (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干; (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测,-20℃保存。 

 

注:这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞,因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少,故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增,其产物通常含有较少的嵌合体(chimera)。

 


改进蛋白酶K(39450-01-6)法提取环境微生物样品总DNA(Zhu S)

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-12 10:03:22

NaAc (3M, pH 5.2) 

蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮  

实验步骤:  

(1) 将适量环境样品(如土壤或污泥)装入1.5 ml Eppendorf管; (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA; 

(3) 加入溶菌酶(sigma)至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h; (4) 冻融三个循环(液氮3 min-65℃干热器3min); 

(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%(wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数),65℃温育1h; 

(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)、氯仿抽提; (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸;-20℃放置1h; 

(8) 离心收集12000prm,10min,回收DNA沉淀; (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干; (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测,-20℃保存。 

 

注:这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞,因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少,故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增,其产物通常含有较少的嵌合体(chimera)。

 


改进蛋白酶K(39450-01-6)法提取环境微生物样品总DNA(Zhu S)

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-12 10:03:22

NaAc (3M, pH 5.2) 

蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮  

实验步骤:  

(1) 将适量环境样品(如土壤或污泥)装入1.5 ml Eppendorf管; (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA; 

(3) 加入溶菌酶(sigma)至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h; (4) 冻融三个循环(液氮3 min-65℃干热器3min); 

(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%(wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数),65℃温育1h; 

(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)、氯仿抽提; (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸;-20℃放置1h; 

(8) 离心收集12000prm,10min,回收DNA沉淀; (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干; (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测,-20℃保存。 

 

注:这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞,因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少,故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增,其产物通常含有较少的嵌合体(chimera)。

 


改进蛋白酶K(39450-01-6)法提取环境微生物样品总DNA(Zhu S)

作者:湖南韵邦生物医药有限公司 浏览: 发表时间:2021-03-12 10:03:22

NaAc (3M, pH 5.2) 

蛋白酶K溶液 20mg/ml (用无菌水配制) 溶菌酶溶液 50mg/ml (用无菌水配制) 液氮  

实验步骤:  

(1) 将适量环境样品(如土壤或污泥)装入1.5 ml Eppendorf管; (2) 加入1 ml 0.15M NaCl-0.1M EDTA; 

(3) 加入溶菌酶(sigma)至终浓度为2mg/ml并置于37℃水浴中温育1h; (4) 冻融三个循环(液氮3 min-65℃干热器3min); 

(5) 分别加入蛋白酶K溶液和SDS至终浓度为0.02和0.5%(wt / vol每一百ml 溶液中溶质克数),65℃温育1h; 

(6) 裂解液依次用等体积的酚、酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)、氯仿抽提; (7) 加入1/4体积的NaAc (3M, pH 5.2)和2体积冷的纯乙醇沉淀核酸;-20℃放置1h; 

(8) 离心收集12000prm,10min,回收DNA沉淀; (9) DNA沉淀用70%乙醇和无水乙醇洗涤后风干; (10) 每管加入30-50ulTE(Tris-HCl缓冲液)回溶及电泳检测,-20℃保存。 

 

注:这种方法比较适合提取土壤环境微生物样品的总DNA。因为本法没有利用机械力量破碎细胞,因而所提取到的总DNA受机械剪切的程度较少,故用这种方法提出的DNA进行PCR扩增,其产物通常含有较少的嵌合体(chimera)。

 


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